南方红豆杉是高效红豆杉科植物南方红豆杉Taxus chinensis （Pilg.）Rehd. var. mairei （Lemee et Levl.）Cheng et L. K. Fu栽培品的干燥枝条。在我国用药历史悠久，液相具有消肿散结、法测方红通经利尿的定南豆杉的含功效，临床上用于治疗癥瘕积聚，中金风湿痹痛，松双水肿，黄酮小便不利。高效历史悠久，液相具有消肿散结、法测方红通经利尿的定南豆杉的含功效，临床上用于治疗癥瘕积聚，中金风湿痹痛，松双水肿，黄酮小便不利。高效
化学成分研究表明，南方红豆杉中有效成分主要为紫杉烷类、黄酮类、多糖类。国内外对南方红豆杉的研究主要集中在以紫杉醇为代表的紫杉烷类，而发挥南方红豆杉药材紫杉烷类、黄酮类、多糖类、酚类等多种活性成分的综合功效，开展中医药临床推广应用，有效部位或活性成分提取、中药新制剂研究等将成为今后的发展方向。
南方红豆杉中的黄酮类化合物含量高，且是一类具有独特药理活性的天然产物，具有降脂、抗血栓、抗肿瘤、抗氧化等作用。药理研究发现，金松双黄酮具有抑制肿瘤转移、提高紫杉醇对肿瘤细胞的凋亡率的作用。
本实验建立了高效液相法测定金松双黄酮含量的方法。并对湖南、浙江、江西、福建不同产地的11批南方红豆杉金松双黄酮的含量进行了考察，为全面评价其质量和开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
仪器:Ultimate3000高效液相色谱仪、Chromeleon7数据处理系统，赛默飞有限公司；KQ5200DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；XSE205DU电子分析天平，梅特勒托利多有限公司。
药材:南方红豆杉药材共11批，经株洲市食品药品检验所吴泽君教授鉴定为红豆杉科植物南方红豆杉Taxus chinensis（Pilger.）Rehd. var. mairei（Lemee et Levl.）Cheng et L. Fu的带叶枝条。
试剂:金松双黄酮（纯度:98% ）；乙腈（色谱纯），水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用AcclaimTM 120 C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）柱，流动相:乙腈-0.2%冰醋酸（70:30），流速:1 mL·min-1；检测波长:330 nm；柱温:30℃；进样量:10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取金松双黄酮对照品18.760 mg至50 mL量瓶中，加入少量DMSO溶解，再加甲醇定容至刻度，配制成浓度为442 μg·mL-1金松双黄酮对照品母液，并用甲醇逐级稀释成标准曲线溶液。
2.3 供试品溶液及空白溶液的制备
取药材粉末（过三号筛）0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，加入甲醇-丙酮（3:1）25 mL，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，加甲醇-丙酮（3:1）补足重量，过滤，取续滤液即得供试品溶液。不加供试品，同法操作，即得空白溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察
精密吸取上述不同浓度的对照品溶液10 μL进样，分别以对照品量C（ng）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得到标准曲线回归方程为:y=0.7609x+0.0153，线性范围为:0.3677～183.85 μg·mL-1，r=0.9999，表明金松双黄酮在线性范围内线性关系良好。
2.4.2 检出限及定量限
将对照品溶液逐级稀释，以信噪比（S/N）为3所对应的浓度为检测限，信噪比（S/N）为10所对应的浓度为定量限。结果金松双黄酮的检出限为0.01 μg·mL-1，定量限为 0.02 μg·mL-1 。
2.4.3 精密度实验
分别取同一供试品溶液，连续进样6次，按照“2.1”项下色谱条件测定，结果是金松双黄酮峰面积的RSD分别为:2.1%，显示精密度良好（n=6）。
2.4.4 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，12，24 h按“2.1”项下色谱条件测定，结果是金松双黄酮的面积的RSD分别为:0.8%，表明金松双黄酮在24 h内稳定（n=6）。
2.4.5 重复性实验
取同一南方红豆杉样品6份，按照“2.3”项下操作，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果是金松双黄酮的面积的RSD分别为:2.6%，表明本方法具有较好的重复性（n=6）。
2.4.6 加样回收率
取南方红豆杉样品0.1 g，精密称定，共9份，分别加入适量的对照品，按“2.3”项下制备成供试品溶液，进行分析，计算加样回收率，结果为金松双黄酮的平均回收率为101.6%，RSD为4.5%。
2.5 样品测定
取11批样品，按照“2.3”项下操作，制备供试品溶液，按 “2.1”项下色谱条件测定，计算含量，结果见图1和表1。
3 讨 论
3.1 提取方法的优化
本实验考察了甲醇、丙酮、甲醇:水（8:2）、乙醇、乙醇:水（8:2）、甲醇:丙酮（1:1）、甲醇:丙酮（3:1）4种提取溶剂，结果以甲醇:丙酮（3:1）提取的效率高，考察了超声、回流2种提取方法，两种方法没有显著性差异，故选择简单操作的超声处理，以甲醇:丙酮（3:1）为提取溶剂。
3.2 样品测定
不同产地南方红豆杉中金松黄酮成分的含量呈现一定的差异，最高为0.65%，最低为0.42%，可能与不同地域、不同采收时间有关，本项目将进一步研究。
综上所述，本方法操作简单，精密度、稳定性、重复性好，可用于南方红豆杉中金松双黄酮成分的测定。
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